מוצרים

הצטברות גרעינית של צורה מוטנטית של החלבון הגרעיני Lamin-A, הנקראת Progerin (PG) או Lamin AΔ50, מתרחשת בתסמונת Hutchinson-Gilford Progeria (HGPS) או Progeria, מחלת הזדקנות מואצת.אחד התסמינים העיקריים של הפרעה גנטית זו הוא אובדן שומן תת עורי עקב ליפודיסטרופיה דרמטית. גרמנו באופן יציב את הביטוי של PG ו-GFP אנושיים -Green Fluorescent Protein- כשליטה בתאי 3T3L1 באמצעות מערכת lentiviral כדי לחקור את השפעת ביטוי PG ביכולת ההתמיינות של שורת תאים זו, אחד המודלים האדיפוגניים הנפוצים ביותר.פרוטאומיקה כמותית (iTRAQ) נעשתה כדי לחקור את ההשפעה של הצטברות PG.כמה מהחלבונים המווסתים אושרו על ידי אימונובלוטינג ו-PCR בזמן אמת.תפקוד המיטוכונדריאלי נותח על ידי מדידה של א) הפעילות הבסיסית המיטוכונדריאלית, ב) ייצור אניון הסופראוקסיד ו-ג) היעילות האינדיבידואלית של הקומפלקס השונה של שרשרת הנשימה. מצאנו שביטוי יתר של PG על ידי מסירת גן lentivi ral מוביל ל- ירידה בקצב ההתפשטות ולפגמים ביכולת האדיפונית בהשוואה לבקרה.ניתוח פרוטאומיקה כמותי הראה 181 חלבונים בעלי מווסת מובהקת (p<0.05) בפראדיפוציטים המבטאים PG.תפקוד המיטוכונדריאלי נפגע בתאים המבטאים PG.באופן ספציפי, זיהינו עלייה בפעילות של הקומפלקס I וייצור יתר של אניון Superoxide.דגירה עם חומרי ניקוי של מיני חמצן תגובתיים (ROS) גורמת לירידה בפרוטאוליזה אוטופגית כפי שמתגלה על ידי יחס LC3-II/LC3-I. ביטוי PG בתאי 3T3L1 מקדם שינויים במספר תהליכים ביולוגיים, כולל מבנה שלד הציטו, מטבוליזם של שומנים, סידן ויסות, תרגום, קיפול חלבון ויצירת אנרגיה על ידי המיטוכונדריה.הנתונים שלנו מחזקים את התרומה של הצטברות ROS לפנוטיפ ההזדקנות המוקדמת ומבססים קשר בין תפקוד לקוי של המיטוכונדריה ואובדן פרוטאוסטזיס ב-HGPS.