מוצרים

מונוגלקטופיראנוזידים של פלואורסאין ופלואורסצין מתיל אסטר: סינתזה, הידרוליזה אנזימטית על ידי β-galactosidase biotnylated, וקביעת מקדם דיפוזיה תרגום

מונוגליקוזידים של פלואורסצאין (d-galactopyranoside (FMG) ו-d-glucopyranoside) והאסטר המתיל שלהם (MFMG) הוכנו מאצטוברומגלוקוז/גלקטוז ו-fluorescein מתיל אסטר בתשואות טובות.ניסויי הידרוליזה אנזימטית (באמצעות β-galactosidase biotinylated) של נגזרות הגלקטו בוצעו ופרמטרים קינטיים חושבו.במהלך ההידרוליזה נצפתה עלייה של פי 15-20 בעוצמת הקרינה.עלייה ליניארית של הקרינה נצפתה בזמן קצר ובריכוז נמוך של מצע, מה שהופך את התרכובות הללו לשימושיות ורגישות לבדיקות גלקטוזידאזות.גודל הערך של קבוע Michaelis-Menten (Km) עבור MFMG גבוה יותר מזה של FMG, דבר המצביע על שינוי קונפורמציה אפשרי של המצע הפלוארוגני.ערך Km עבור β-Gal ביוטיניל עם FMG נמוך מזה של האנזים המקומי.תצפית זו מצביעה על זיקה סובסטרט גבוהה יותר של האנזים הביוטיניל בהשוואה לאנזים המקומי.מקדמי דיפוזיה תרגום נמדדו, הן עבור מצעים פלואורגניים והן עבור המוצרים, תוך שימוש בספקטרוסקופיה של מתאם פלואורסצנטי.מקדמי דיפוזיה תרגום עבור מצעים פלואורגניים ותוצרי ההידרוליזה האנזימטית נמדדו דומים, בטווח של 3.5-4.5 × 10-10 m2 s-1.לפיכך שיפור או עיכוב של הקינטיקה האנזימטית עקב הבדל בניידות התרגום של המצע והמוצר אינו כל כך ברור.