מוצרים

מסלולים מולקולריים פתוגניים במחלות כבד שחמת כמו הפטיטיס C (HCV), הפטיטיס אוטואימונית (AIH) ושחמת מרה ראשונית (PBC) מאופיינים בצורה גרועה.גנים המבוטאים בצורה דיפרנציאלית הם לעתים קרובות חשובים בפתוגנזה של המחלה.היברידית חיסורית של דיכוי (SSH) היא גישה רחבה של הגנום המעשירה עבור תעתיקי mRNA בעלי ביטוי דיפרנציאלי.מטרתנו הייתה לבצע תצפיות חדשות על ביטוי גנים דיפרנציאלי בשחמת באמצעות SSH בשילוב עם תגובת שרשרת של פולימראז הפוך בזמן אמת בזמן אמת (RT-PCR).תעתיקי כבד בשחמת HCV, AIH cirrhosis, PBC ורקמת כבד לא חולה נבדקו על ידי SSH.שיבוטים של DNA משלים (cDNA) שהתקבלו נבדקו מחדש לביטוי דיפרנציאלי על ידי הכלאה נקודתית ולאחר מכן רצף.ביטוי גנים נבחר נכמת על ידי RT-PCR בזמן אמת.בעקבות SSH, 694 שיבוטים נבדקו מחדש לביטוי גנים דיפרנציאלי, מתוכם 145 רצפו ונמצאו נובעים מ-89 גנים שונים.שבעה שיבוטים היו הומולוגיים רק עם רצפי תג רצף מפורש (EST) המקודדים לגנים ללא תפקיד ידוע.ביטוי מווסת למעלה של ארבעה גנים אושר על ידי RT-PCR בזמן אמת: טרנסממברנה 4 חבר על משפחה 3 (טטרספנין CO-029) בכל הצורות של שחמת, חלבון אינטראקציה עם קיפוד (HIP) בשחמת AIH ו-chitinase 3-like-1 (HC gp-39 או ykl-40) וחומצה ארגינין-גלוטמית חוזרת (RERE) בשחמת HCV.בכל הרקמות שנבדקו נצפו פולימורפיזמים של גן RERE וגרסאות שחבור.ויסות-על של טטרספאנין CO-029 היה מקומי בעיקר לתאי צינוריות מרה.לסיכום, תצפיות חדשות של ביטוי גנים דיפרנציאלי בשחמת אנושי נעשו באמצעות SSH ככלי הגילוי העיקרי.בפרט, יש צורך במחקרים נוספים על הגן RERE ומוצריו במחלת כבד הקשורה ל-HCV.