מוצרים

X-gal (בקיצור גם BCIG ל-5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside) היא תרכובת אורגנית המורכבת מגלקטוז המקושר לאידול חלופי.התרכובת סונתזה על ידי ג'רום הורביץ ומשתפי פעולה בשנת 1964. השם הכימי הפורמלי מקוצר לעתים קרובות לביטויים פחות מדויקים אך גם פחות מסורבלים כגון ברומוכלורואינדוקסיל גלקטוזיד.ה-X מאינדוקסיל עשוי להיות מקור ה-X בהתכווצות X-gal.X-gal משמש לעתים קרובות בביולוגיה מולקולרית כדי לבדוק נוכחות של אנזים, β-galactosidase, במקום המטרה הרגילה שלו, β-galactoside.הוא משמש גם לאיתור פעילות של אנזים זה בהיסטוכימיה ובבקטריולוגיה.X-gal הוא אחד מבין גליקוזידים ואסטרים אינדוקסיל רבים המניבים תרכובות כחולות בלתי מסיסות הדומות לצבע אינדיגו כתוצאה מהידרוליזה מזורזת אנזים.

X-gal הוא אנלוגי ללקטוז, ולכן עשוי לעבור הידרוליזה על ידי האנזים β-galactosidase אשר מבקע את הקשר β-glycosidic ב-D-lactose.X-gal, כאשר מבוקע על ידי β-galactosidase, מניב גלקטוז ו-5-ברומו-4-כלורו-3-הידרוקסי-אינדול - 1. האחרון לאחר מכן מתמזג באופן ספונטני ומתחמצן ל-5,5'-דיברומו-4,4'-דיכלורו -אינדיגו - 2, מוצר כחול עז שאינו מסיס.X-gal עצמו הוא חסר צבע, ולכן נוכחות של מוצר בצבע כחול עשויה לשמש כבדיקה לנוכחות של β-galactosidase פעיל.זה גם מאפשר להשתמש ב-β-galactosidase חיידקי (מה שנקרא lacZ) ככתב ביישומים שונים.

בניתוח שני כלאיים, β-galactosidase עשוי לשמש ככתב לזיהוי חלבונים המקיימים אינטראקציה זה עם זה.בשיטה זו, ספריות גנום עשויות להיבדק לאינטראקציה עם חלבון באמצעות שמרים או מערכת חיידקים.כאשר יש אינטראקציה מוצלחת בין חלבונים הנבדקים, היא תגרום לקשירה של תחום הפעלה למקדם.אם הפרומוטור מקושר לגן lacZ, ייצור β-galactosidase, שגורם ליצירת מושבות כחולות פיגמנט בנוכחות X-gal, יצביע אפוא על אינטראקציה מוצלחת בין חלבונים.טכניקה זו עשויה להיות מוגבלת לספריות הקרנה בגודל של פחות מסביבות 106. המחשוף המוצלח של X-gal יוצר גם ריח רע בולט עקב הנידוף של אינדול.

מכיוון ש-X-gal עצמו חסר צבע, ניתן להשתמש בנוכחות של מוצר בצבע כחול כבדיקה לנוכחות של β-galactosidase פעיל.

זיהוי קל זה של אנזים פעיל מאפשר להשתמש בגן ​​של βgalactosidase (גן lacZ) כגן מדווח ביישומים שונים.