מוצרים

התמיינות של פיברובלסטים אורביטליים לאדיפוציטים בוגרים והצטברות של רקמת שומן לאחר מכן הוכחה בהתקדמות של אורביטופתיה של גרייבס (GO).אוטופגיה מעורבת באדיפוגנזה, אך מעט ידוע על תפקידה של אוטופגיה בתחילת והתקדמות של GO.מטרת מחקר זה היא לחקור את תפקידה של אוטופגיה בפתוגנזה של GO. השתלי שומן/רקמת חיבור אורביטלית מחולים עם GO ומנבדקים נורמליים, כמו גם פיברובלסטים אורביטליים מבודדים, נותחו.אדיפוגנזה נגרמה באמצעות מדיום מבחנה עם או בלי מי חמצן, ואוטופאגיה בוצעה באמצעות bafilomycin A1 ו-Atg5 ממוקד RNA קצר סיכת שיער (shRNA).אוטופגוזומים זוהו על ידי מיקרוסקופ אלקטרונים.ביטוי של גנים הקשורים לאטופאגיה וגורמי שעתוק הקשורים לאדיפוגנזה נותחו על ידי תגובת שרשרת של שעתוק הפוך בזמן אמת ו/או אנליזה של Western blot.הצטברות טיפות שומנים נבדקה על ידי צביעת Oil Red O. Vacuoles אוטופאגיים היו בשפע רב יותר בתאי GO מאשר בתאים שאינם GO (p<0.05).ביטוי של גנים הקשורים לאוטופגיה היה גבוה משמעותית ברקמות ובתאים GO מאשר בעמיתיהם שאינם GO, בהתאמה.Interleukin-1β הגדיל את חלבון LC3-II, p62 ו-Atg7 בתאי GO.הצטברות אוטופגוזומים הוצגה ביום ה-4 של האדיפוגנזה וירדה עד היום ה-10, יחד עם היווצרות טיפות שומנים.ביטוי של חלבוני LC3 ו-p62 עלה תוך 48 שעות מההתמיינות ופחת בהדרגה מהיום ה-4 ל-10. טיפול ב-Bafilomycin A1 ודפיקת Atg5 על ידי shRNA עיכבו הצטברות טיפות שומנים ודיכא ביטוי של סמנים אדיפוגניים. האוטופגיה גדלה ברקמות ובתאים GO בהשוואה ל- רקמות ותאים שאינם GO, מה שמצביע על כך שאוטופגיה משחקת תפקיד בפתוגנזה של GO.מניפולציה של אוטופגיה עשויה להיות מטרה טיפולית עבור GO.