מוצרים

פיתחנו מערכת אספקת RNA מתערבת קטנה (siRNA) חדשה באמצעות קומפלקס טרינרי עם פוליאתילןאימין (PEI) וחומצה γ-פוליגלוטמית (γ-PGA), שהראתה אפקט השתקה וללא ציטוטוקסיות.הקומפלקסים הבינאריים של siRNA עם PEI היו בערך 73-102 ננומטר בגודל החלקיקים ו-45-52 mV בפוטנציאל ζ.השפעת ההשתקה של קומפלקסים siRNA/PEI גדלה עם עלייה ב-PEI, ומתחמי siRNA/PEI עם יחס מטען גבוה מ-16 הראו נוק-דאון משמעותי של luciferase בקו תאי קרצינומה של המעי הגס של עכברים המבטאים באופן קבוע לוציפראז (Colon26/Luc cells).עם זאת, ציטוטוקסיות חזקה ואגלוטינציה בדם נצפו בקומפלקס siRNA/Lipofectamine ו-siRNA/PEI16.טעינת קומפלקסים קטיוניים בתרכובת אניונית דווחה כשיטה מבטיחה להתגברות על רעילות אלו.לכן הכנו קומפלקסים טרינריים של siRNA עם PEI (יחס מטען 16) על ידי הוספת γ-PGA כדי להפחית ציטוטוקסיות ולספק siRNA.כצפוי, הציטוטוקסיות של הקומפלקסים הטרינריים ירדה עם עלייה בתכולת γ-PGA, מה שהפחית את פוטנציאל ה-ζ של הקומפלקסים.אפקט השתקה חזק הדומה לקומפלקס siRNA/Lipofectamine התגלה בקומפלקסים טרינריים הכוללים γ-PGA עם מטען פני השטח אניוני.השילוב הגבוה של קומפלקסים טרינריים בתאי Colon26/Luc אושר באמצעות מיקרוקופי פלואורסצנטי.לאחר שהשיגה נוק-דאון של גן שעבר העברה אקסוגנית, נבדקה יכולתו של הקומפלקס לתווך נוק-דאון של גן משק בית אנדוגני, glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), בתאי B16-F10.הקומפלקס הטרינרי (קומפלקס siRNA/PEI16/γ-PGA12) הפגין אפקט GAPDH נוק-דאון משמעותי.לפיכך, פיתחנו מערכת אספקת siRNA שימושית.