מוצרים

תובנות מכניות על משפחה תלויה ב-Ca2+ של אלפא-מאנזידאזות בסימביונטה של ​​המעי האנושי.

חיידקי המעי הגס, המודגמים על ידי Bacteroides thetaiotaomicron, ממלאים תפקיד מפתח בשמירה על בריאות האדם על ידי רתימת משפחות גדולות של גליקוזידים הידרולאזים (GHs) לניצול פוליסכרידים תזונתיים וגליקנים מארח כחומרי הזנה.הרחבת משפחת GH כזו מודגמת על ידי 23 הגליקוזידאזות ממשפחת GH92 המקודדות על ידי הגנום B. thetaiotaomicron.כאן אנו מראים כי אלו אלפא-מאנזידאזות הפועלות באמצעות מנגנון תזוזה יחיד לניצול N-גליקנים מארח.המבנה התלת מימדי של שני GH92 mannosidases מגדיר משפחה של חלבונים דו תחומים שבהם המרכז הקטליטי ממוקם בממשק התחום, ומספק סיוע חומצה (גלוטמט) ובסיס (אספרטאט) להידרוליזה ב- Ca(2+)- אופן תלותי.המבנים התלת מימדיים של ה-GH92s במתחם עם מעכבים מספקים תובנה לגבי הספציפיות, המנגנון והמסלול הקונפורמטיבי של קטליזה.Ca(2+) ממלא תפקיד קטליטי מרכזי בסיוע לעיוות את המנוסייד הרחק מקונפורציית הכיסא שלו במצב הקרקע (4)C(1) לקראת מצב המעבר. (ביבליוגרפיה: Nat.Chem.ביול.6, 125-32, (2010）

כרומטוגרפיה של זיקה חזיתית של ovalbumin glycoaspargines על עמודת concanavalin A-sepharose.מחקר כמותי של סגוליות הקישור של הלקטין.

האינטראקציות של Sepharose 4B-immobilized concanavalin A (ConA) עם 10 glycoaspargines המופקים מאולבומין נחקרו כמותית על ידי כרומטוגרפיה של זיקה חזיתית.בשיטה זו, תמיסת פחמימות מיושמת באופן רציף על עמודת ConA-Sepharose והפיגור של חזית הפליטה נמדד כפרמטר לחוזק האינטראקציה.ניתן לקבוע את קבוע הדיסוציאציה (Kd) עבור כל סכריד עם ConA.ניתוח של הקישור של p-nitrophenyl-alpha,D-mannoside הראה שתכונות הקישור של ConA אינן משתנות באופן מהותי לאחר אימוביליזציה על Sepharose 4B.כל אחד מה-ovalbumin glycoaspargines סומן בטריטיום בשיטת המתילציה הרדוקטיבית לצורך ניתוח.השוואה של ערכי Kd שהתקבלו הראתה שהקישור של ConA משתנה במידה ניכרת עם הבדלים מבניים קלים מאוד של שרשרת הגליקוזיל.התוצאות מצביעות על כך ש-ConA מזהה מבנה שרשרת גליקוזיל ספציפי, Man alpha 1-6(Man alpha 1-3)Man, שבו לפחות קבוצת הידרוקסיל אחת במיקום C-3 של מנוז מקושר C-6 צריכה להיות חופשית.