מוצרים

בדיקת כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים עבור גליקוזילטרנספראזות המבוססת על נגזרת עם חומצה אנתרנילית וזיהוי פלואורסצנציה.

מבחני פותחו תוך שימוש בכימיית התיוג הייחודית של חומצה 2-aminobenzoic (2AA; חומצה אנתרנילית, AA) למדידת פעילויות של שני β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) ו-α2-6 sialyltransferase (ST-6) על ידי נוזל בעל ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה (HPLC) עם זיהוי פלואורסצנציה (Anumula KR. 2006. התקדמות בשיטות נגזרת פלואורסצנציה לניתוח כרומטוגרפי נוזלי בעל ביצועים גבוהים של פחמימות גליקופרוטאין. Anal Biochem. 350:1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) ו-N-acetyllactosamine שימשו כמקבלים ו-Uridine diphosphate (UDP)-galactose ו- cytidine monophosphate (CMP)-N-acetylneuraminic acid (NANA) כתורמים עבור GalT-1 ו-ST-6, בהתאמה.מוצרים אנזימטיים סומנו באתרם עם AA והופרדו מהמצעים על עמודת TSKgel Amide 80 בתנאים של שלב נורמלי.יחידות האנזים נקבעו מאזורי השיא בהשוואה לסטנדרטים שנגזרו במקביל Gal-β1-4GlcNAc ו-NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.נקבעו ליניאריות (זמן וריכוז אנזים), דיוק (תוך ואינטראקטיבי) ושחזור של המבחנים.המבחנים נמצאו שימושיים בניטור פעילויות האנזים במהלך בידוד וטיהור.המבחנים היו רגישים ביותר ובוצעו שווה או טוב יותר מהמדידות המסורתיות מבוססות סוכר רדיואקטיביות.ניתן להשתמש בפורמט הבדיקה גם למדידת הפעילות של טרנספראזות אחרות, בתנאי שמקבלי הפחמימות מכילים קצה מפחית לתיוג.בדיקה למקבלי גליקופרוטאין פותחה באמצעות IgG.פותחה שיטת פרופיל HPLC קצרה להפרדה של גליקנים מסוג IgG (בי-אנטנרי G0, G1, G2, מונו-ודי-סיאלילי), אשר הקלה על קביעת פעילויות GalT-1 ו- ST-6 בצורה מהירה.יתר על כן, שיטת פרופיל זו אמורה להיות שימושית לניטור השינויים בגליקנים מסוג IgG בסביבה קלינית.