מוצרים

הטופולוגיה של הממברנה של תחום ערוץ colicin E1 נחקרה על ידי העברת אנרגיית תהודה פלואורסצנטית (FRET).ה-FRET כלל חומצת אמינו פלואורסצנטית מקודדת גנטית (קומרין) בתור התורם ושארית ציסטאין מסומנת סלקטיבית קשורה עם DABMI (4-(דימתילאמינו)פנילאזופניל-4'-מאלאימיד) כמקבל FRET.שאריות הקומרין הפלורסנטיות שולבו בחלבון באמצעות זוג סינתטאז tRNA/aminoacyl-tRNA אורתוגונלי שאיפשר שילוב סלקטיבי בכל אתר בתוך תחום ערוץ הקוליצין.כל וריאנט טומן בחובו מוטציית עצירה (TAG) לשילוב קומרין ומוטציית ציסטאין (TGT) להתקשרות DABMI.שישה מרחקים בין-הליליים בתוך סלילים 1-6 נקבעו באמצעות ניתוח FRET עבור המצבים המסיסים והקשורים לממברנה כאחד.נתוני ה-FRET הראו שינויים גדולים במרחקים הבין-הליליים בין סלילים 3-6 עם אסוציאציה של ממברנה וסיפקו תובנה חדשה לגבי המבנה המחובר לממברנה של תחום הערוץ.באופן כללי, היעילות הבין-הליקלית של קומרין-DABMI FRET פחתה עם קשירת הממברנה, תוך התבססות על מודל הגג של תעלת הקוליצין.מודל טנטטיבי למצב הסגור של תחום הערוץ פותח על סמך נתוני FRET עדכניים ופורסמו בעבר.המודל מציע סידור מעגלי של סלילים 1-7 בכיוון השעון מהצד החוץ-תאי ומקשר הממברנה של סלילים 1, 6, 7 ו-10 סביב סיכת השיער הטרנסממברנית המרכזית שנוצרה על ידי סלילים 8 ו-9.