מוצרים

נזק חמצוני לבסיסי DNA גורם בדרך כלל להיווצרות פורינים מחומצנים, במיוחד 7,8-דיהידרו-8-אוקסוגואנין (8-oxoG) ו-7,8-דיהידרו-8-אוקסואדנין (8-oxoA), שהראשון הוא טוב- נגע מוטגני ידוע.מכיוון ש-8-oxoG נתון בקלות לחמצון נוסף בהשוואה לבסיסים רגילים, החדרת בסיס במהלך סינתזת DNA מול צורה מחומצנת של 8-oxoG נחקרה במבחנה.תבנית סינתטית המכילה נגע בודד של 8-oxoG טופלה תחילה עם חומרי חמצון שונים של אלקטרון אחד או בתנאי חמצן בודד ולאחר מכן טופלה להארכת פריימר מזורזת על ידי Klenow fragment exo- (Kf exo-), עגל תימוס DNA פולימראז אלפא (פול אלפא ) או DNA פולימראז בטא אנושי (פול בטא).בהתאם לדיווחים הקודמים, dAMP ו-dCMP מוכנסים באופן סלקטיבי מול 8-oxoG עם כל שלושת ה-DNA פולימראזות.באופן מעניין, נמצא שחמצון של 8-oxoG גורם להחדרת dAMP ו-dGMP מול הנגע על ידי Kf exo- עם עיכוב חולף של הארכת פריימר במקום הבסיס המשתנה.יתר על כן, הנגע מהווה חסימה במהלך סינתזת DNA על ידי פול אלפא ופול בטא.ניסויים עם אוליגונוקלאוטיד תבנית עם שינוי 8-oxoA מראים שגם 8-oxoA וגם צורה מחומצנת של 8-oxoA החדרה ישירה של dTMP על ידי Kf exo-.ניתוח המוני ספקטרומטרי של אוליגונוקלאוטידים המכילים 8-oxoG לפני ואחרי חמצון עם IrCl62- עולים בקנה אחד עם חמצון של בעיקר אתר 8-oxoG, וכתוצאה מכך נוצרת קבוצת גואנידינוהידנטואין כתוצר העיקרי.לא הושגה עדות להיווצרות אתרים א-בסיסיים.תוצאות אלו מוכיחות שצורה מחומצנת של 8-oxoG, אולי גואנידינוהידנטואין, עשויה לכוון קריאה שגויה והכנסה שגויה של dNTPs במהלך סינתזת ה-DNA.אם תהליך כזה התרחש in vivo, הוא ייצג נגע מוטגני נקודתי המוביל להעברות G-->T ו-G-->C.עם זאת, הצורה המחומצנת המתאימה של 8-oxoA מציגה בעיקר החדרה נכונה של T במהלך סינתזת DNA עם Kf exo-.