מוצרים

האופן שבו השפעות של מוטציות בו-זמניות משתלבות לשינוי פעילות אנזימטית אינה ניתנת לחיזוי בקלות מכיוון שהשפעות אלו אינן תמיד תוספות באופן ליניארי.מכאן שאפיון ההשפעות של מוטציות בו-זמניות של שאריות חומצות אמינו הקושרות את המצע יכול לתרום תרומה משמעותית להבנת סגוליות הסובסטרט של אנזימים.ב-beta-glycosidase מ- Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), שני השאריות Q39 ו-E451 מתקשרות עם המצע וזה חיוני להגדרת סגוליות המצע.מוטנטים כפולים של Sfbetagly (A451E39, S451E39 ו-S451N39) הוכנו על ידי מוטגנזה מכוונת-אתר, המתבטאת בחיידקים ומטוהרת באמצעות כרומטוגרפיה זיקה.אנזימים אלו אופיינו באמצעות p-nitrophenyl beta-galactoside ו-p-nitrophenyl beta-fucoside כמצעים.יחס k cat/Km עבור מוטנטים בודדים וכפולים של Sfbetagly המכילים מוטציות מכוונות אתרים בעמדות Q39 ו-E451 שימש כדי להדגים כי ההשפעה על האנרגיה החופשית של פגיון ESdouble (קומפלקס מצב-מעבר אנזים) של המוטציות הכפולות (Gdouble) daggerxy) אינו סכום ההשפעות הנובעות מהמוטציות הבודדות (Gdouble daggerx ו-Gdouble daggery).הבדל זה בפגיון Gdouble מצביע על כך שההשפעות של המוטציות הבודדות חופפות חלקית.לפיכך, ההשפעה הנפוצה הזו נחשבת רק פעם אחת ב-Gdouble daggerxy.נתונים קריסטלוגרפיים על בטא-גליקוזידאזות חושפים נוכחות של קשר מימן דו-צדדי הכולל שיירים Q39 ו-E451 ואותה קבוצת הידרוקסיל של המצע.לכן, נתונים תרמודינמיים וקריסטלוגרפיים מצביעים על כך ששאריות Q39 ו-E451 מפעילים השפעה הדדית על האינטראקציות שלהם עם המצע.